上海研吉生物有限公司代理各种 ELISA 试剂盒,抗体,涉及分子生物学、分子免疫学、细胞生物学、部分国产化学试剂和实验仪器等生命科学研究的各个领域.为了节省您的时间,我们还可以提供代检测服务.
ELISA 试验时,注意事项如下:
1.正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性.有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭.
2.在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等.其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等.目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板.不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好.
(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间.吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时.蛋白质包被的**适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值.选择OD值**而蛋白量**少的浓度.对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml.
(3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份).然后再固定其它条件或采取"方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度.
(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色.有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护.有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体.底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应.通常底物作用时间,以10-30分钟为宜.底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入.乙肝表面抗体定量(HBsAb),乙肝试剂盒
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